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　　HPLC是上世紀(jì)六七十年代發(fā)展起來(lái)的新型分離分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用在制藥、化工、環(huán)境、食品等領(lǐng)域，各行業(yè)實(shí)驗(yàn)室均能看到大量HPLC身影。

　　HPLC系統(tǒng)由脫氣機(jī)(內(nèi)置、外置)、泵、自動(dòng)(手動(dòng))進(jìn)樣器、柱溫箱(選配)、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等模塊構(gòu)成。

　　HPLC實(shí)驗(yàn)室儀器管理

　　針對(duì)每臺(tái)儀器建立檔案及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP

　　每臺(tái)HPLC檔案需包括：品牌、產(chǎn)地、主體流路材質(zhì)(兼容溶劑)、耐壓范圍、正相系統(tǒng)或反相系統(tǒng)(主要看泵密封圈材質(zhì))、對(duì)應(yīng)維修工程師及應(yīng)用工程師的電話。保證出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)快速聯(lián)系獲取解決方案，將儀器的損害盡可能的降低。

　　HPLC主體流路材質(zhì)一般有不銹鋼SST、鈦Ti或MP35N(MP35N合金是一種無(wú)磁的鎳鈷鉻鉬合金)，普通液相系統(tǒng)無(wú)特殊說(shuō)明一般為不銹鋼系統(tǒng)，鈦或MP35N多用于BioHPLC系統(tǒng)中，比不銹鋼系統(tǒng)更耐腐蝕，和更好的生物兼容性。

　　針對(duì)每臺(tái)儀器編寫完整的操作規(guī)程，應(yīng)涉及到電壓、開關(guān)機(jī)順序及注意事項(xiàng)，使用人在申用儀器時(shí)應(yīng)注意儀器的情況，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)記錄并上報(bào)。對(duì)儀器的使用和維護(hù)記錄嚴(yán)格審核。

　　物料管理

　　所有進(jìn)入液相色譜系統(tǒng)的溶劑均應(yīng)是色譜純，樣品應(yīng)經(jīng)過(guò)相應(yīng)的前處理，確保樣品的潔凈度，不會(huì)堵塞和污染系統(tǒng)。使用的進(jìn)樣小瓶規(guī)格要與自動(dòng)進(jìn)樣器匹配，瓶子隔墊要與樣品溶劑兼容。如需過(guò)濾，應(yīng)選擇與溶劑兼容的濾膜材質(zhì)，避免濾膜溶脹或反應(yīng)等結(jié)果導(dǎo)致樣品污染或系統(tǒng)堵塞等問(wèn)題。

　　相關(guān)規(guī)定

　　(1)儀器申用的規(guī)范化預(yù)約：有電子平臺(tái)在電子平臺(tái)上申請(qǐng)預(yù)約，沒(méi)電子平臺(tái)可制定手工或電子臺(tái)賬記錄具體情況。

　　(2)制定并嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)定。

　　(3)嚴(yán)格按照儀器SOP規(guī)定使用。

　　(4)完善使用記錄的書寫，執(zhí)行復(fù)核審查。

　　(5)儀器的維護(hù)規(guī)程的制定與執(zhí)行。

　　環(huán)境要求

　　儀器使用環(huán)境應(yīng)無(wú)塵，通風(fēng)良好，溫度保持在(15-30)℃，室內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)在5%-85%范圍內(nèi)，儀器應(yīng)平穩(wěn)的放在試驗(yàn)臺(tái)上，周圍無(wú)強(qiáng)烈機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾源。電壓應(yīng)符合響應(yīng)廠商的安裝使用要求。

　　HPLC維護(hù)

　　目前各廠商生產(chǎn)制造的液相色譜儀主要分兩類，一類是一體機(jī)，另一類是模塊化分體機(jī)。一體機(jī)體積小巧、安裝、移機(jī)便捷;分體機(jī)維修方便，各有優(yōu)勢(shì)。對(duì)于這兩類液相系統(tǒng)總體維護(hù)是相似的。

　　液相色譜系統(tǒng)分為脫氣機(jī)(包括內(nèi)置和外置兩種)、泵、自動(dòng)進(jìn)樣器(手動(dòng)進(jìn)樣閥)、柱溫箱、檢測(cè)器等功能模塊。

　　1、脫氣機(jī)的維護(hù)：

　　為避免脫氣機(jī)污染：應(yīng)嚴(yán)格過(guò)濾并定期更新溶劑，定期潤(rùn)洗脫氣機(jī)溶劑通道，對(duì)于走水相的通道這點(diǎn)非常重要。使用有機(jī)溶劑充分的潤(rùn)洗所有通道(使用干凈的溶劑瓶)，在使用水和乙腈或甲醇作為流動(dòng)相時(shí)每周充分潤(rùn)洗脫氣機(jī)通道一次。然而在色譜中反復(fù)出現(xiàn)鬼峰時(shí)，應(yīng)及時(shí)調(diào)整潤(rùn)洗周期，并按下面的步驟進(jìn)行相應(yīng)的潤(rùn)洗。

　　在泵出口安裝背壓管，并調(diào)整壓力至200-300bar

　　用20%的硝酸在常規(guī)流速下沖洗1小時(shí)(使用新鮮的HPLC級(jí)水)

　　用HPLC級(jí)水潤(rùn)洗通道知道PH測(cè)試為中性

　　再用HPLC級(jí)乙腈在常規(guī)流速下潤(rùn)洗2小時(shí)

　　用干凈的溶劑瓶裝上新配置的流動(dòng)相并與脫氣機(jī)連接

　　安裝新的溶劑過(guò)濾器

　　拆除背壓管并重新按照要求連接系統(tǒng)

　　平衡系統(tǒng)

　　有些品牌的液相色譜儀只有反相脫氣包，當(dāng)使用正相系統(tǒng)時(shí)，要求短接脫氣機(jī)。有些品牌亦有正相脫氣包，使用時(shí)應(yīng)注意，避免溶劑對(duì)脫氣包材質(zhì)造成不可逆的損壞。

　　2、溶劑吸濾頭維護(hù)

　　室溫較高時(shí)，使用純水相或有機(jī)相比例較低時(shí)，流動(dòng)相應(yīng)臨用現(xiàn)配及時(shí)清洗吸濾頭以防吸濾頭堵塞。

　　定期檢查溶劑過(guò)濾頭，尤其是水及相似溶劑作為流動(dòng)相時(shí)，細(xì)菌等微生物及其代謝產(chǎn)物容易沉淀堵塞濾頭。所以定期更換溶劑，并在清潔溶劑瓶后重新裝入新的溶劑，必要時(shí)，更換新的溶劑濾頭。

　　3、泵的維護(hù)

　　泵的易損件主要為單向閥、過(guò)濾白頭、柱塞桿、柱塞密封圈等，做好泵頭的維護(hù)，反相系統(tǒng)使用緩沖鹽時(shí)應(yīng)使用seal wash清洗，如沒(méi)有自動(dòng)后密封清洗系統(tǒng)，可以手動(dòng)清洗，當(dāng)使用正相系統(tǒng)時(shí)選擇適宜的溶劑清洗。

　　應(yīng)注意有些品牌的后密封清洗系統(tǒng)的溶劑瓶是循環(huán)的，有些品牌是非循環(huán)利用的，對(duì)于循環(huán)式的后密封清洗系統(tǒng)應(yīng)定期更換儲(chǔ)液瓶中的溶劑，避免溶劑中緩沖鹽濃度過(guò)高起不到清洗的作用，以及溶劑瓶中滋生微生物。對(duì)于非循環(huán)的溶劑瓶除了定期更換溶劑外還應(yīng)注意，不要讓溶劑瓶中的溶劑跑空。

　　如果要使用了高濃度鹽類流動(dòng)相(通常大不超過(guò)1moL/L)，在后密封清洗系統(tǒng)沒(méi)有充分運(yùn)行(大于5min)的情況下，嚴(yán)禁運(yùn)行泵，否則將造成柱塞桿及柱塞密封的損壞。

　　泵的部件中有peek(聚醚醚酮)材質(zhì)組件，在使用lv仿CHCL3，四氫fu喃THF，二甲基亞砜DMSO等溶劑時(shí)，peek材質(zhì)的管線或其他部件會(huì)發(fā)生溶脹現(xiàn)象，建議更換耐受以上溶劑的不銹鋼備件或鈦或者M(jìn)P35N等材質(zhì)的備件。

　　4、Purge閥維護(hù)

　　不要用工具來(lái)擰緊purge閥，過(guò)緊可能會(huì)損壞密封墊，并且必須在系統(tǒng)壓力為0時(shí)的情況打開或者關(guān)閉purge閥。

　　5、在線過(guò)濾器

　　purge中含有在線過(guò)濾器，當(dāng)系統(tǒng)背壓高時(shí)考慮更換新的在線過(guò)濾器濾芯。有些品牌是主動(dòng)閥或者被動(dòng)閥，需要更換閥中的過(guò)濾白頭。

　　通常情況下，泵的柱塞密封墊由*分子量聚乙烯(UHMW-PE)材料制成。當(dāng)使用lv仿、三氯代苯、二氯甲烷、四氫fu喃或甲苯做溶劑時(shí)會(huì)對(duì)UHMW-PE密封墊造成化學(xué)損傷。在使用四氯化碳、二yi醚、yi醚、二異丙醚、酮類、甲苯、甲基環(huán)已胺及氯苯時(shí)還可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。不同制造商的密封墊材質(zhì)有不同，有些是PTFE材質(zhì)的還有石墨的。

　　6、自動(dòng)進(jìn)樣器的維護(hù)

　　不同品牌的自動(dòng)進(jìn)樣器結(jié)構(gòu)有所差異，應(yīng)詳見廠商說(shuō)明書做好維護(hù)。洗針液應(yīng)定期更換，當(dāng)使用內(nèi)插管進(jìn)樣瓶時(shí)，應(yīng)及時(shí)調(diào)整進(jìn)樣針高度，避免對(duì)硬件造成損傷，當(dāng)出現(xiàn)進(jìn)樣體積重復(fù)性不好的情況時(shí)，排除儀器故障問(wèn)題，由于進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)負(fù)壓造成的，對(duì)于高沸點(diǎn)難揮發(fā)的樣品可選用欲開口進(jìn)樣隔墊。

　　定期檢查進(jìn)樣針位置，防止進(jìn)樣時(shí)扎偏損壞硬件。

　　溶劑的選擇：

　　所有不銹鋼、鈦合金、及寶石PCTFE聚三氟氯乙烯、PTFE聚四氟乙烯、peek聚醚醚酮等材質(zhì)制造的部件都長(zhǎng)期浸泡在溶劑中。

　　必須使用與管道材質(zhì)匹配的標(biāo)準(zhǔn)試劑盒緩沖鹽溶液。特別注意類似高粘度、低沸點(diǎn)、有紫外吸收(UV-VIS檢測(cè)器)、高折射率(RID檢測(cè)器)及可揮發(fā)溶劑(脫氣機(jī))

　　高濃度緩沖鹽溶劑，通常大不超過(guò)1moL/L，使用時(shí)應(yīng)確認(rèn)后密封清洗系統(tǒng)運(yùn)行再正確的清洗溶劑上。

　　自動(dòng)進(jìn)樣器大致分為兩類不帶溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器和帶溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器，對(duì)于可進(jìn)行溫控的自動(dòng)進(jìn)樣器要注意及時(shí)清理冷凝水，定期清洗樣品盤避免進(jìn)樣針堵塞

　　針座漏液需要更換針座密封，針座堵了可以通過(guò)反沖的方式解決。

　　進(jìn)樣閥如漏液需更換進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封等組件。

　　7、柱溫箱的維護(hù)

　　一般沒(méi)有需要特殊維護(hù)的地方

　　8、檢測(cè)器的維護(hù)

　　檢測(cè)器需要維護(hù)的部件主要是燈和流通池。定期檢測(cè)燈能量，必要時(shí)更換燈。當(dāng)結(jié)果譜圖出現(xiàn)異常時(shí)確認(rèn)是否是流通池污染導(dǎo)致的，及時(shí)清洗流通池。

　　常見問(wèn)題及解決方案：

　　壓力問(wèn)題

　　1、壓力低

　　(1)低粘度流動(dòng)相 解決辦法：使用Kozeny-Carmen或類似方程計(jì)算預(yù)期壓力

　　(2)活塞密封墊泄漏 解決辦法：檢查是否存在漏液現(xiàn)象，必要時(shí)更換相關(guān)部件

　　(3)系統(tǒng)泄漏 解決辦法：檢查是否有漏液，擰緊或更換相關(guān)漏液部件

　　(4)系統(tǒng)中有氣泡 解決辦法：確保溶劑瓶或溶劑管線經(jīng)過(guò)*灌洗，且purging閥*關(guān)閉，脫氣機(jī)正常工作。

　　(5)溶劑過(guò)濾吸頭、單向閥及管線等壓力傳感器之前的部件堵塞。解決辦法：用分段排除法檢查系統(tǒng)管路是否堵塞。

　　(6)泵流速故障 解決辦法：用計(jì)量過(guò)的器皿判斷泵流量是否準(zhǔn)確，確認(rèn)故障報(bào)修。

　　2、壓力高

　　(1)高粘度流動(dòng)相 解決辦法：使用Kozeny-Carmen或類似方程計(jì)算預(yù)期壓力

　　(2)泵流速故障 解決辦法：用計(jì)量過(guò)的器皿判斷泵流量是否準(zhǔn)確，確認(rèn)故障報(bào)修。

　　(3)壓力傳感器之后的管路堵塞、檢測(cè)器流通池、自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針或針座堵塞。解決辦法：用分段排除法確定堵塞的位置，沖洗(反沖)或更換相關(guān)部件。

　　(4)保護(hù)柱或分析柱堵塞。解決辦法：沖洗(反沖)或更換相保護(hù)柱或分析柱。

　　3、壓力波動(dòng)

　　(1)單向閥堵塞造成 解決辦法：超聲清洗單向閥

　　(2)管路中有氣泡 解決辦法：重新purge管路

　　二、基線問(wèn)題

　　1、基線波動(dòng)、基線漂移

　　(1)系統(tǒng)未平衡 解決辦法：至少10倍柱體積平衡系統(tǒng)。注意室溫是否穩(wěn)定避免空調(diào)出風(fēng)口直吹儀器。

　　(2)流通池中有氣泡 解決辦法:沖洗流通池

　　(3)保護(hù)柱被污染 解決辦法：更換保護(hù)柱

　　(4)檢測(cè)器污染 解決辦法：按照廠商要求清洗流通池

　　(5)溶劑被污染 解決辦法：更換溶劑

　　(6)檢測(cè)器燈能量低 解決辦法:更換相關(guān)燈

　　(7)梯度洗脫 解決辦法：使用純度更高的溶劑或選擇其他波長(zhǎng)，如還存此情況屬正?，F(xiàn)象

　　(8)系統(tǒng)泄漏 解決辦法：檢查泄漏位置，擰緊或更換泄漏處部件。

　　(9)溫度波動(dòng) 解決辦法：使用柱溫箱，如條件要求苛刻可使用柱前加熱模塊及柱后冷卻模塊?？刂剖覝?，避免空調(diào)出風(fēng)口直吹儀器。

　　(10)色譜柱污染 解決辦法：更換保護(hù)柱必要時(shí)更換分析柱

　　(11)泵未適當(dāng)混合溶劑 解決辦法;等度洗手動(dòng)混合，在梯度洗脫時(shí)如儀器為低壓系統(tǒng)確保比例閥正常工作，如儀器時(shí)高壓系統(tǒng)確保泵流速混合器正常工作。

　　(12)溶劑過(guò)濾器堵塞 解決辦法：超聲(浸泡)清洗溶劑過(guò)濾器，應(yīng)注意材質(zhì)是否可以超聲。

　　三、峰形問(wèn)題

　　1、峰展寬

　　系統(tǒng)未平衡 解決辦法：用至少10倍柱體積平衡系統(tǒng)

　　進(jìn)樣溶劑過(guò)強(qiáng) 解決辦法：確保進(jìn)樣溶劑強(qiáng)度與流動(dòng)相強(qiáng)度相當(dāng)或更弱

　　進(jìn)樣體積過(guò)高 解決辦法：減少進(jìn)樣體積

　　柱外體積過(guò)高 解決辦法：減小樣品濃度

　　溫度波動(dòng) 解決辦法：使用柱溫箱

　　保護(hù)柱污染或失效 解決辦法：更換新的保護(hù)柱

　　分析柱污染或失效 解決辦法：沖洗色譜柱必要時(shí)更換色譜柱

　　柱外體積過(guò)大樣品擴(kuò)散 解決辦法：減小柱外體積

　　2、雙峰

　　(1)色譜柱過(guò)舊，色譜柱填料有塌陷，柱校低 解決辦法：更換色譜柱

　　(2)色譜柱污染 解決辦法：沖洗色譜柱

　　3、倒峰

　　(1)溶劑被污染或進(jìn)樣溶劑紫外吸收比流動(dòng)相低 解決辦法：更換新配置的溶劑，第二種情況可以忽略

　　(2)檢測(cè)器信號(hào)正負(fù)極設(shè)置反了，此時(shí)峰全部為負(fù) 解決辦法：更改檢測(cè)器設(shè)置

　　(3)RI檢測(cè)器未平衡 按廠商要求平衡系統(tǒng)

　　4、平頭峰

　　(1)檢測(cè)器過(guò)載 解決辦法：減小樣品濃度

　　(2)檢測(cè)器設(shè)置 解決辦法：檢查檢測(cè)器衰減并重新校零

　　5、峰拖尾

　　(1)保護(hù)柱過(guò)舊 解決辦法：更換保護(hù)柱

　　(2)色譜柱過(guò)載 解決辦法：減小進(jìn)樣體積或減小進(jìn)樣濃度

　　(3)色譜柱柱校低 解決辦法：更換色譜柱，對(duì)于有極性基團(tuán)容易與流動(dòng)相產(chǎn)生氫鍵易拖尾的化合物，可選擇雙重封端的色譜柱，或在不影響分析結(jié)果的情況下，加入掃尾劑，改善峰行。

　　(4)色譜柱污染 解決辦法：沖洗甚至更換色譜柱

　　6、峰前沿

　　(1)溶劑效應(yīng) 解決辦法：更換進(jìn)樣溶劑確保進(jìn)樣溶劑強(qiáng)度與流動(dòng)相相當(dāng)或更弱

　　(2)色譜柱過(guò)載 解決辦法：減小進(jìn)樣體積或濃度

　　7、峰面積重現(xiàn)性不好

　　(1)峰面積減小，樣品降解解決辦法：新配置樣品，對(duì)溫度敏感的生物樣品應(yīng)使用可控溫的自動(dòng)進(jìn)樣器

　　(2)峰面積過(guò)小，樣品濃度過(guò)低，解決辦法：增大樣品濃度

　　(3)檢測(cè)器設(shè)置，選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)

　　(4)進(jìn)樣量錯(cuò)誤 解決辦法：檢查調(diào)整進(jìn)樣針高度確保進(jìn)樣量準(zhǔn)確，計(jì)量泵正常工作

　　(5)樣品粘度太大 解決辦法：延長(zhǎng)注射器的吸液時(shí)間

　　(6)檢測(cè)器燈能量低 解決辦法：更換燈

　　8、鬼峰

　　系統(tǒng)中存在污染 解決辦法：排查溶劑、流動(dòng)相、分析柱、保護(hù)柱、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、管路等，沖洗或更換被污染的試劑或原件。

　　保留時(shí)間漂移

　　系統(tǒng)未平衡好 解決辦法：延長(zhǎng)平衡時(shí)間

　　系統(tǒng)漏液 解決辦法：檢查漏液位置，擰緊或更換接頭或管線

　　溫度波動(dòng) 解決辦法：使用柱溫箱，控制室溫，避免空調(diào)直吹儀器

　　泵流量有誤差 解決辦法：聯(lián)系報(bào)修

　　比例閥或混合器故障 解決辦法：聯(lián)系報(bào)修

　　HPLC是我們工作中重要的儀器之一，俗話說(shuō)知己知彼百戰(zhàn)不殆，我們充分了解了partner才能工作的更順利，事半功倍。