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紫外可見分光光度計的結(jié)構(gòu)原理及應(yīng)用
  • 發(fā)布日期:2019-02-12      瀏覽次數(shù):2778
    •   一、什么是紫外可見分光光度計

        紫外可見分光光度計是一類很重要的分析儀器,無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門,紫外可見分光光度計都有廣泛而重要的應(yīng)用。

        分光光度計是杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人在1854年將朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域,并且設(shè)計了臺比色計。到1918年,美國國家標準局制成了臺紫外可見分光光度計。此后,紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進,又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也不斷擴大。目前市場上有兩類主流產(chǎn)品:掃描光柵式分光光度計和固定光柵式分光光度計。

        二、紫外可見分光光度計的發(fā)展

        在分光元器件方面,經(jīng)歷了棱鏡、機刻光柵和全息光柵的過程,商品化的全息閃耀光柵已迅速取代一般刻劃光柵。在儀器控制方面,隨著單片機、微處理器的出現(xiàn)以及軟硬件技術(shù)的結(jié)合,從早期的人工控制進步到了自動控制。在顯示、記錄與繪圖方面,早期采用表頭(電位計)指示、繪圖儀繪圖,后來用數(shù)字電壓表數(shù)字顯示,如今更多地采用液晶屏幕或計算機屏幕顯示。在檢測器方面,早期使用光電池、光電管,后來更普遍地使用光電倍增管甚至光電二極管陣列。陣列型檢測器和凹面光柵的聯(lián)合應(yīng)用,使儀器的測量速度發(fā)生了質(zhì)的飛躍。

        在儀器構(gòu)型方面,從單光束發(fā)展為雙光束,現(xiàn)在幾乎所有分光光度計都是雙光束的,有些高精度的儀器采用雙單色器,使得儀器在分辨率和雜散光等方面的性能大大提高。隨著集成電路技術(shù)和光纖技術(shù)的發(fā)展,聯(lián)合采用小型凹面全息光柵和陣列探測器以及USB接口等新技術(shù),已經(jīng)出現(xiàn)了一些攜帶方便、用途廣泛的小型化甚至是掌上型的紫外可見分光光度計。而光電子技術(shù)和MEMS技術(shù)的發(fā)展,使得有可能將分光元件和探測器集成在一塊基片上,制作微型分光光度計。隨著發(fā)光二極管(LED)光源技術(shù)及產(chǎn)業(yè)的日益成熟,以LED為光源的小型便攜又低廉的分光光度計已成為研究開發(fā)的熱點。除了空間色散的分光方式,也有人對聲光調(diào)制濾光和傅立葉變換光譜在紫外可見區(qū)的應(yīng)用進行了研究。

        儀器的軟件功能可以極大地提升儀器的使用性能和價值,現(xiàn)代分光光度計生產(chǎn)廠商都非常重視儀器配套軟件的開發(fā)。除了儀器控制軟件和通用數(shù)據(jù)分析處理軟件外,很多儀器針對不同行業(yè)應(yīng)用開發(fā)了分析軟件,給儀器使用者帶來了極大的便利。

        三、紫外可見分光光度計的結(jié)構(gòu)

        一般地,紫外可見分光光度計主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測系統(tǒng)組成,如圖1所示。光源發(fā)出的復(fù)合光通過單色器被分解成單色光,當單色光通過樣品室時,一部分被樣品吸收,其余未被吸收的光到達檢測器,被轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?,?jīng)電子電路的放大和數(shù)據(jù)處理后,通過顯示系統(tǒng)給出測量結(jié)果。

        分光光度計的主要部件如下所述。

        光源:發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜,有足夠的光強度,穩(wěn)定。可見光區(qū):鎢燈,碘鎢燈(320~2500nm)紫外區(qū):氫燈,氘燈(180~375nm);氙燈:紫外、可見光區(qū)均可用作光源。

        單色器:將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。

        棱鏡:依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同。

        光柵:在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過光柵時發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。

        吸收池:用于盛待測及參比溶液??梢姽鈪^(qū):光學(xué)玻璃池;紫外區(qū):石英池。

        檢測器:利用光電效應(yīng),將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號。光電池,光電管,光電倍增管。

        檢流計(指示器):刻度顯示或數(shù)字顯示、自動掃描記錄。

        四、紫外可見分光光度計的原理

        物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。

        分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比,其數(shù)學(xué)表示式如下

        A=abc

        A—吸光度;a—摩爾吸光系數(shù);b—吸收介質(zhì)的厚度;c—吸光物質(zhì)的濃度。

        光學(xué)系統(tǒng)原理

        由光源鎢燈和氘燈發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)由步進電機控制帶動反光鏡M1,反射通過入射狹縫,并進入單色器中,光柵衍射出的單色光經(jīng)準直鏡M2調(diào)焦,會聚通過出射狹縫,光束到達斬光器時,一段時間內(nèi)的光射成為參比光路,另一段時間內(nèi)的光透射成為樣品光路。后兩光交替地照射在檢測器(光電倍增管),如圖2所示。

        電器系統(tǒng)原理

        光電倍增管檢測出的信號經(jīng)由前置放大器,驅(qū)動卡傳遞給微機控制器,由微機控制器推動驅(qū)動卡居中協(xié)調(diào)各部分,如圖3所示。

        五、紫外可見分光光度計的特點

        分光光度法對于分析人員來說,可以說是常用和有效的工具之一。幾乎每一個分析實驗室都離不開紫外可見分光光度計。分光光度法具有以下主要特點。

        1.靈敏度高

        由于新的顯色劑的大量合成,并在應(yīng)用研究方面取得了可喜的進展,使得對元素測定的靈敏度有所推進,特別是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到數(shù)十萬。

        2.選擇性好

        目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。

        3.準確度高

        對于一般的分光光度法,其濃度測量的相對誤差在1~3%范圍內(nèi),如采用示差分光光度法進行測量,則誤差可減少到0.X%。

        4.適用濃度范圍廣

        可從常量(1%~50%)(尤其使用示差法)到痕量(10-8~10-6%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

        5.分析成本低、操作簡便、快速、應(yīng)用廣泛

        由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。在上發(fā)表的有關(guān)分析的論文總數(shù)中,光度法約占28%,我國約占所發(fā)表論文總數(shù)的33%。

        六、紫外可見分光光度計的應(yīng)用

        1.檢定物質(zhì)

        根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收,特別是大吸收波長λ max和摩爾吸收系數(shù)ε,是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。

        2.與標準物及標準圖譜對照

        將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒有標樣,也可以和現(xiàn)成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確,精密度高,且測定條件要相同。

        3.比較大吸收波長吸收系數(shù)的一致性

        由于紫外吸收光譜只含有2~3個較寬的吸收帶,而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收,與分子和其它部分關(guān)系不大。具有相同發(fā)色團的不同分子結(jié)構(gòu),在較大分子中不影響發(fā)色團的紫外吸收光譜,不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜,但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標準樣品的吸收波長相同,吸收系數(shù)也相同,則可認為分析樣品與標準樣品為同一物質(zhì)。

        4.反應(yīng)動力學(xué)研究

        借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù),并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù),得出反應(yīng)活化能。

        5.純度檢驗

        紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì)。如果化合物的紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰,而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強的吸收峰,就可以檢測出化合物中的雜質(zhì)。

        6.氫鍵強度的測定

        不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度,以確定選擇哪一種溶劑。

        7.絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定

        金屬離子常與有機物形成絡(luò)合物,多數(shù)絡(luò)合物在紫外可見區(qū)是有吸收的,我們可以利用分光光度法來研究其組成。

       

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